Geelelektroforees on laboritehnika, mida kasutatakse geneetikas DNA-d, RNA-d ja muid valke sisaldavate segude eraldamiseks vastavalt nende molekuli suurusele ja laengule. Geelelektroforees võib olla kahel erineval viisil: horisontaalne geelelektroforees ja vertikaalne geelelektroforees.
Mis on elektroforeesi põhimõte ja selle seos molekulmassiga?
DNA, RNA või valgud, mis tuleb selle meetodi puhul eraldada, juhitakse läbi väikeseid poore sisaldava geeli. Molekulid juhitakse läbi geeli elektrivälja abil. Molekulid läbivad geeli poorid ja liikumiskiirus on pöördvõrdeline nende vastavate pikkustega. Seetõttu liiguvad väiksema molekulmassiga molekulid kiiremini kui suurema molekulmassiga molekulid. Elektrivälja tekitab geeli kahe otsa laengu erinevus. Üks ots sisaldab positiivset laengut ja teine ots sisaldab negatiivset laengut.
Horisontaalses geelelektroforeesis on geel horisontaalses asendis ja sukeldatud pidevalt töötavasse puhvrisse, mis asub geelikarbis endas. Vertikaalses geelelektroforeesis on puhversüsteem vertikaalselt orienteeritud ja katkendlik, üla- ja alaosas on kaks kambrit, millel on vastavalt katood ja anood. See on peamine erinevus horisontaalse ja vertikaalse geelelektroforeesi vahel.
Horisontaalne geelelektroforees
Horisontaalne geelelektroforees kasutab põhiteooriat DNA, RNA või valgu molekulide eraldamiseks vastavalt nende molekuli suurusele ja laengule. Selle tehnika puhul on geel horisontaalses asendis ja sukeldatud pidevasse puhvrisse. Agaroosgeeli kasutatakse geelikarbi eraldamiseks kaheks kambriks.
Horisontaalses geelelektroforeesis ei saa akrüülamiidi kasutada, kuna geelikarp puutub kokku hapnikuga. Hapniku olemasolu tõttu on akrüülamiidi polümerisatsioon pärsitud, mis häirib geeli moodustumist. Horisontaalne geelelektroforees on vaevatu meetod, mida kasutatakse DNA ja RNA eraldamiseks.
Vertikaalne geelelektroforees
See tehnika kasutab katkendlikku puhvrit. Katood asub ülemises kambris ja anood asub alumises kambris. Igas sektsioonis olevad elektroodid tagavad vajaliku elektrivälja. Kahe paigaldatud klaasplaadi vahele valatakse õhuke kiht geeli. Seetõttu on geeli ülemine osa kastetud ülemisse kambrisse ja geeli alumine osa alumisse kambrisse.
Vertikaalses geelelektroforeesis voolab puhver ainult läbi geeli. Võib kasutada akrüülamiidgeeli, kuna sektsioonid ei puutu kokku õhuhapnikuga. Akrüülamiidgeeli väiksema pooride suuruse tõttu saab täpset eraldamist saavutada suurema eraldusvõimega.
At Kalstein oleme TOOTJAD, seega saate oma laborisse OSTA suurepäraseid elektroforeesisüsteeme suurepäraste HINDADEGA. Seetõttu kutsume teid vaatama: SIIN
