Elektroforees on üks peamisi molekulaarbioloogia tehnikaid, neid peetakse laborites kõige enam kasutatavaks tehnikaks kõiges, mis on seotud nukleiinhapete uurimisega. Elektroforeesi abil saame eraldada DNA ja RNA fragmente nende suuruse ja elektrilaengu alusel läbi poorse materjali (geeli) migreerumise, visualiseerida neid värvimise teel ning määrata nukleiinhapete või valkude sisaldust proovis. , saades seega hinnangu selle kontsentratsioonile.
Selles tehnikas kasutatav poorne geel toimib molekulaarsõelana, mis eraldab suuremad molekulid väiksematest. Väiksemad molekulid liiguvad kiiremini läbi geeli, samas kui suuremad jäävad maha. Osakeste liikuvust kontrollib ka nende individuaalne elektrilaeng.
Milleks kasutatakse elektroforeesi?
Elektroforeesil on palju praktilisi rakendusi, näiteks kohtumeditsiinis kuriteos osalenud inimeste tuvastamiseks, inimgenoomi projektis, valkude ja geneetiliste mutatsioonide uurimisel, sest kui seda tüüpi muutused eksisteerivad, on muudetud valgud või kromosoomid. , ilmuvad elektroforeesigeelil lühemalt või pikemalt tavalistest ja kliinilistest diagnostilistest testidest erineval viisil, võimaldades haigusi õigeaegselt diagnoosida.
Kus tehakse elektroforeesi?
Elektroforees viiakse läbi seadmega, mida nimetatakse elektroforeesisüsteemiks, mille ühes otsas on negatiivne ja teises positiivne laeng. Laetud molekulide sisestamisel selles keskkonnas lähevad negatiivsed ühte äärmusse ja positiivsed vastavasse teise, jälgides lõpuks õiget migratsioonimustrit, mis sõltub molekulide suurusest ja laengust.
Kuidas geelelektroforeesi tehakse?
Geelelektroforeesis kasutatav geel on tavaliselt valmistatud agaroosist, mis on merevetikatest ekstraheeritud želatiinne aine, või ka polüakrüülamiidist. Seda poorset geeli saab kasutada mitme erineva suurusega makromolekulide eraldamiseks. Geel sukeldatakse elektroforeesikambris puhverlahusesse. Tavaliselt kasutatakse puhvrina Tris-borate-EDTA (TBE). Selle peamine ülesanne on kontrollida süsteemi pH-d.
Seejärel laaditakse analüüsitavad proovid pipeti abil geelis asuvatesse pisikestesse süvenditesse. Kui kaevud on täielikult laetud, rakendatakse 50-150 V elektrivoolu. See põhjustab proovis sisalduvate laetud molekulide migreerumist läbi geeli elektroodidele.
Kiirust, millega iga molekul liigub läbi geeli, nimetatakse selle elektroforeetiliseks liikuvuseks ja selle määrab peamiselt neto laeng ja suurus. Tugevalt laetud molekulid liiguvad kiiremini kui nõrgalt laetud molekulid.
Kui eraldamine on lõppenud, värvitakse geel värvainega, et paljastada eraldusribad. Etiidiumbromiidina on see fluorestseeruv värv, mida tavaliselt kasutatakse geelelektroforeesis. Geeli leotatakse lahjendatud etiidiumbromiidi lahuses ja asetatakse seejärel eraldusribade visualiseerimiseks UV-transilluminaatorisse. Ribasid uuritakse kohe või pildistatakse edaspidiseks kasutamiseks, kuna need hajuvad aja jooksul geeli sisse.
At Kalstein oleme TOOTJAD ja pakume teile suurepäraseid elektroforeesisüsteeme turu parimate HINDADEGA. Seetõttu kutsume teid vaatama: SIIN
