Elektroforees on analüütiline meetod, mille käigus kasutatakse kontrollitud elektrivoolu, et eraldada biomolekulid nende suuruse ja elektrilaengu suhte järgi, kasutades alusena želatiinset maatriksit.
Milliseid rektiive kasutatakse elektroforeesis?
Elektroforees viiakse läbi seadmetega, mille ühes otsas on negatiivne ja teises positiivne laeng, mida nimetatakse elektroforeesisüsteemiks. Selle tehnika puhul kasutatakse selliseid reaktiive nagu:
Laadimispuhver: see on lahus, mis segatakse prooviga enne selle geelile kandmist. Selle komponendid teenivad mitut eesmärki:
DNA elektroforeesis: glütserool, et lisada proovile tihedust ja hõlbustada selle kandmist süvenditesse. Bromofenoolsinine (või mõni muu värvaine, näiteks ksüleentsüanool) elektroforeesi edenemise markerina. Samuti on selle värv visuaalseks abiks proovi süvenditesse laadimisel. Puhver pH stabiliseerimiseks ja seega ka molekulide laengu stabiliseerimiseks.
SDS-PAGE valgu elektroforeesis nimetatakse seda ka purunemispuhvriks (kuna see põhjustab denaturatsiooni): glütserool, et lisada proovile tihedust ja hõlbustada selle kandmist süvenditesse. Bromofenoolsinine elektroforeesi edeneva rinde markerina. Samuti on selle värv visuaalseks abiks proovi süvenditesse laadimisel. SDS, mis põhjustab valgu denaturatsiooni (mida aitab lühiajaline kuumutamine temperatuurini 90–100 °C). β-merkaptoetanool disulfiidsidemete purustamiseks (redutseerimisreaktsioon, disulfiid muundatakse kaheks tiooliks). Puhver pH stabiliseerimiseks ja seega ka molekulide laengu stabiliseerimiseks.
- DNA agaroos: see on polüsahhariid, mida sünteesivad mõned vetikad ja mis on osa agar-agarist (kultuurisöötme koostisosa). Selle kasutamiseks elektroforeesis kasutatakse rohkem puhastatud toodet.
- Polüakrüülamiid: Polüakrüülamiid on ristseotud polümeer, mis moodustab poorseid geele. Akrüülamiidi ja bisakrülamiidi [N,N'-metüleen-bis(akrüülamiid)] segu keemiline polümerisatsioon viiakse läbi.
- Ammooniumpersulfaadi DNA valgud: kuigi see ei ole geeli komponent, kasutatakse seda reagendina polüakrüülamiidi moodustamisel.
- TEMED: Tetrametüületüleendiamiin (TEMED) kiirendab akrüülamiidi polümerisatsioonireaktsiooni, kuna see soodustab vabade radikaalide teket. Hõlbustab reaktsiooni, mille käigus moodustub akrüülamiidpolümeer.
- Coomassie Blue: täisnimi on Coomassie R-250 Brilliant Blue. See on värviline ühend, mis seondub igasuguste valkudega.
- Bromofenoolsinine: see on värviline ja laetud ühend, mida kasutatakse elektroforeesi edenemise kontrollimiseks. Elektroforeesis liigub see oma väiksema suuruse tõttu kiiremini kui valgud või enamik DNA molekule (need suuremad kui 300 aluspaari), see tähendab, et see tähistab "edasirinde".
- Ksüleentsüanool: need on värvilised ja laetud ühendid, mida kasutatakse elektroforeesi edenemise kontrollimiseks. Elektroforeesis liigub ksüleen-tsüanool ligikaudu 3,500 kuni 5,000 aluspaari suuruse DNA molekulina.
- Etiidiumbromiid: see on interkaleeruv ühend, see tähendab, et sellel on afiinsus DNA-ga seondumiseks, kuna see sisestatakse selle virnastatud aluste vahele. Selle kasulikkus tuleneb ka selle fluorestsentsist, mida suurendab hüdrofoobses keskkonnas viibimine, st seondumine DNA-ga. Seda ergastatakse lühilainelise ultraviolettvalgusega, 254 nm, ja kiirgab oma fluorestsentsi nähtava valgusena, roosakasoranži värviga.
At Kalstein oleme TOOTJAD, pakume teile suurepäraseid elektroforeesisüsteeme parimate HINDADEGA. Seega kutsume teid vaatama: SIIN
