Termotsükler ehk termiline sekveneerija on laboriseade, mis võimaldab teostada DNA molekulide amplifitseerimist PCR (Polymerase Chain Reaction) tehnika abil tsükliliste temperatuurimuutuste kaudu, mis tekitavad nende üheahelalisel nukleiinhappe amplifikatsioonil. . Seda seadet kasutatakse kvalitatiivseks amplifikatsiooniks või isegi amplifitseeritud DNA koguse kvantifitseerimiseks.
PCR-tehnika toimub automaatse protsessi käigus ja seda saab lõpetada vaid mõne tunniga. Seda protsessi juhib täielikult termotsükler, mis on programmeeritud muutma reaktsiooni temperatuuri iga paari minuti järel, mis teeb võimalikuks denaturatsiooni ja DNA sünteesi.
Selle tehnika võib jagada kahte suurde kategooriasse:
- PCR ühe teadaoleva genoomi saidi (lookuse) amplifitseerimiseks: seda tüüpi PCR puhul on vaja teada järjestust, mille kallal töötatakse ja selle kaudu on võimalik teha fülogeneesid.
- PCR, mille puhul ei ole vaja teada amplifitseeritavat piirkonda (amplifitseeritakse tundmatuid piirkondi, näiteks genoomi hüpervarieeruvaid piirkondi), mistõttu ei ole teada, kui suur on oodatavate fragmentide suurus. Seda kasutatakse geneetilise polümorfismi määramiseks.
Kuidas termotsükleri valmistatakse?
Termotsükler koosneb üldiselt elektritakistuse plokist, mis jaotab programmeeritava aja jooksul ühtlase temperatuuri (vahemikus 4–96 °C) läbi plaadi. Osades seadmetes on elektritakistus asendatud Peltieri tehnoloogiaga (pooljuhid), mis võimaldab temperatuuri suuremat homogeensust.
Peate meeles pidama, et lõpp-punkti PCR-is kasutatav termotsükler ei ole sama, mida kasutatakse reaalajas PCR-is, kuna viimane peab tuvastama fluorestsentsi ja erinevates neeldumiskanalites.
Termotsükleri töö
Teine samm seisneb praimerite joondamises amplifitseeritavale matriitsi ahelale. See etapp kestab ligikaudu 20 sekundit ja siin reguleerib termotsükler temperatuuri vahemikus 40 ° C kuni 60 ° C, sellel temperatuuril tekivad pidevalt ja katkevad oligonukleotiidide ja DNA vahelised vesiniksidemed, samuti lähimad ristmikud. Stabiilne kestab kauem, praimerid on joondatud, moodustades seega väikese kaheahelalise piirkonna. See juhtub seetõttu, et see sõltub kõige rohkem selles toimingus kasutatavatest praimeritest.
Kolmas samm on eelmises etapis loodud 20 paarist koosneva kaksikahela pikenemine polümeraasi liitumise kaudu, mis hakkab kopeerima 5-3 suunas, lisades veel mõned alused ja moodustades vesiniku. sillad aluste vahel. Selles etapis saavutatakse temperatuur 72 °C, mis on optimaalne temperatuur või polümeraasi kõrgeim aktiivsus, mis jätkab DNA fragmentide sünteesi joondatud praimeritest.
Pärast seda sammu on väga tõenäoline, et see naaseb umbes 98 sekundiks esimesele 10ºC ja seejärel korrake tsüklit veel 30–45 korda. Peale neid 3 sammu lisatakse veel üks aste kuumust, vähemalt 72 kraadi vähemalt 7 minutiks. See on vajalik praimerite ja polümeraasi DNA ahelate uuesti pesastamiseks. Seejärel langeb temperatuur 15 ja 4ºC, et hoida proovi ideaalses seisukorras kuni hetkeni, mil seda vajatakse.
At Kalstein oleme TOOTJAD ja pakume teile suurepärast valikut termotsükleid parimate HINDADEGA. Seetõttu kutsume teid vaatama meie saadaolevaid termotsükleid: SIIN
