Elektroforees on laboritehnika, mille käigus kasutatakse kontrollitud elektrivoolu, et eraldada läbi poorse maatriksi biomolekulid vastavalt nende suurusele ja elektrilaengule. Elektroforeesi peamiste rakenduste hulgas võib mainida:
Isoelektrilise punkti määramine
Isoelektrilise fokuseerimisega saadakse valkude isoelektrilise punkti mõõt (pHI või pI).
Isoensüümid
Elektroforees, täpsemalt isoelektriline fokuseerimine, võimaldab rutiinselt analüüsida ensüümi variante, mille struktuuris ja ensüümi aktiivsuses on väikesed erinevused.
Molekulmassi määramine
Elektroforeesi abil saab SDS-PAGE abil saada hinnangu valkude molekulmassi (kDa) ja DNA fragmentide (bp) kohta. Mõlemal juhul laaditakse geeli ühte süvendisse teadaoleva suurusega standardmolekulide segu, et saaks joonistada kalibreerimiskõvera. Valkude puhul sõltub saadud andmete kehtivus sellest, kas denatureerimine SDS-iga on lõppenud ja kas subühikud on eraldatud tänu merkaptoetanooliga redutseerimisele; lisaks muudab oligosahhariidide olemasolu glükoproteiinides liikuvust, mis ei anna enam usaldusväärseid molekulmassi väärtusi.
Kui tahame hinnata valgu molekulmassi, kantakse SDS-PAGE ühte süvendisse teadaoleva suurusega ühest subühikust koosneva valkude segu, mida nimetatakse standarditeks või molekulmassimarkeriteks. geel. . Pärast nende eraldamist elektroforeesis selgub liikuvus (edasijõudnud kaugus või, parem, jagatis selle ja elektroforeesi frondi edenemise vahel) ja joonistatakse kõigi ribade jaoks vastavalt suuruse logaritmile (suhteline molekulmass, Mr). Regressioonijoonel interpoleeritakse uuritavate proovide vahekaugused, arvutades nii nende näiva molekulmassi.
Kui soovitakse teada DNA fragmentide suurust, kantakse geeli ühte süvendisse teadaoleva suurusega DNA fragmentide segu, mida nimetatakse "standarditeks", "molekulaarseteks markeriteks" (DNA redel). Pärast nende eraldamist elektroforeesis ilmneb liikuvus (edasijõudnud kaugus või, parem, jagatis selle ja elektroforeesi frondi edenemise vahel) ja kantakse kõigi ribade jaoks graafikule suuruse logaritmi (pikkus bp-des) suhtes. Regressioonisirgel interpoleeritakse probleemsete valimite vahekaugused, arvutades seega nende suuruse bp-des.
Piirangukaardid
DNA test restriktsiooniensüümidega on üks viise, kuidas uurida nukleiinhapete järjestust ja seejärel analüüsida saadud fragmente agaroosgeelelektroforeesiga ning proovida rekonstrueerida algse molekuli järjestust, moodustades selle restriktsioonikaardi. üks füüsilise kaardi tüüpe ja on üks elektroforeesi konkreetseid rakendusi.
Nukleiinhapete sekveneerimine
Täieliku järjestuse saamine nukleotiidide kaupa sõltub ka DNA fragmentide elektroforeetilisest analüüsist Maxami ja Gilberti keemilise meetodi või Sangeri ensümaatilise meetodi abil. Sel juhul kasutatakse fragmentide väiksuse tõttu polüakrüülamiidgeele, mis on võimelised eraldama fragmente, mis erinevad ühe nukleotiidi poolest.
At Kalstein oleme TOOTJAD ja pakume teile suurepärast elektroforeesisüsteemi turu parima HINNAGA. Seetõttu kutsume teid vaatama: SIIN
