Kuidas polümeraasi ahelreaktsioon toimub?

september 11, 2022by Kalstein
termociclador-pruebas-analisis-adn-pcr-contexto-laboratorio-medico_74906-2273.jpg

Polümeraasi ahelreaktsiooni (molekulaarbioloogilistes laborites kasutatav keemiline reaktsioon) kasutatakse selliste geenide või kromosoomide teatavate muutuste uurimiseks, mis annavad teavet geneetilise seisundi või haiguse, näiteks vähi diagnoosimiseks. Seda kasutatakse ka teatavate bakterite, viiruste või mikroorganismide DNA-osade tuvastamiseks nakkuse avastamiseks.

Sel eesmärgil kasutatakse termotsüklit uudse tehnoloogilise vahendina nukleiinhapete uurimiseks. Seda iseloomustab kõrge tundlikkuse, reprodutseeritavuse ja tõhususe meetod, mis annab lühikese aja jooksul usaldusväärseid tulemusi ning mida on lihtne analüüsida DNA järjestuse in vitro paljundamisel, kasutades väga kiireid pidevaid kütte- ja jahutusprotsesse (üle 1 °C/s), mida on võimalik edasi uurida.

polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) areng

Esiteks on polümeraasi ahelreaktsioon in vitro ensümaatiline resistentsus, mis suurendab konkreetset DNA järjestust miljoneid kordi valge seeria pikemate imitatsiooniperioodide jooksul. Selleks kasutatakse DNA polümeraasi ensüümi aktiivsust, mis võib loomulikult sünteesida DDNA-d rakkudes.
Selleks viiakse iga PCR-tsükkel läbi kolmes põhietapis:

  • denaturatsioon. Selles etapis kuumutatakse DNA ahelaid 20-30 sekundit ja eraldatakse temperatuuril 95 °C; aeg sõltub tagasihoidlikust järjestusest, st kui G-C kogus on suur, kulub nende liigeste lõhkumiseks rohkem aega, sest nende aluste kate on kolm paari, üks rohkem kui A-T alused. Samuti sõltub see kiirusest, millega termokütt temperatuuri tõstab, mis varieerub sõltuvalt seadme mudelist.
  • Saavutada järgmised ahelad.
  • hübridisatsioon. Selles etapis keskendub esimene eelnevalt eraldi mõõdetud temperatuurile ja ühendab selle täiendava järjestusega. Selleks on hübridisatsioonitemperatuur vahemikus 50-60 °C. kus
  • Esimene on korrektselt projekteeritud ja temperatuur on õige ning kompleksi stabiilsus ja spetsiifilisus on tõhusad.
    laienemine. Selles etapis toimib Taq polümeraas keskmise raskusega eelmälus ja algab väga kiire katalüütilise aktiivsusega.
  • Kettide laienemine kulgeb DNA sünteesi suunas, s.o 5-3 tolli. Reaktsiooni optimaalne temperatuur on 72 °C, kuna ensüüm toimib sellel temperatuuril.

Laiendused on konfigureeritud suuruse järgi, mis määratakse kindlaks aluspaari (pb) koguarvu alusel, mille teadlane peab avalikustama.

PCR-tulemuste analüüs

Proovi eduka tugevdamise avastamiseks on reaktsioonianalüüs viimane etapp kvantifitseerimisel. Sel eesmärgil varustatakse termokütte personaalarvutiga, millel on tarkvara, mida on tavaliselt lihtne kasutada. See tarkvara loob graafikakomplekti, mis näitab kõiki vajalikke andmeid, et teada saada, kas vastus oli edukas.

Teine oluline samm analüüsis on valida kvantifitseerimismeetod, mis määrab täpselt kindlaks geensuse suurenemise, mis sõltub teadlase huvidest. Selleks on kahte liiki kvantifitseerimist: absoluutne ja suhteline. Esimene on teada rikastatud valgete koopiate täpne arv või nukleiinhappe täpne kontsentratsioon proovis. Seda kasutatakse viiruse või bakteriga kokkupuute mõõtmiseks erinevates kudedes. Teist kasutatakse geeni ekspressiooni muutuste hindamisel erinevates füsioloogilistes tingimustes. Olenemata kvantifitseerimise tüübist, on meeskonnatarkvara võimeline teostama iga kvantifitseerimistüübi jaoks vajalikke matemaatilisi ja statistilisi analüüse.

Termotsükkel

Kalsteinis on meil kõige laialdasem tehnoloogia koolitatud laborite rühmades, et täita kõiki meie klientide nõudmisi. Sellisel juhul esitleme yr-seeria termotuumikreid järgmiste üldiste ja atraktiivsete omadustega: pidulik ja elegantne välimus, uuenduslik disain. Ainult pöörleva kokpiti soojusregulaatorid. Mango moodul, ohutum ja mugavam mooduli hankimiseks, tõhusam andmevahetus ja pikem kasutusiga. Suure eraldusvõimega LCD-ekraan. mäluvõti väljumisel. Kontrolli oma eksperimente. 5.7 LCD kuvamisliides. temperatuuriregulaator, toruplokk. Lisaks pakume teile parimaid nõuandeid, et muuta ost optimaalseks ja odavaks. Et meie kataloogi kohta rohkem teada saada, SIIN.

Lisateavet leiate meie veebilehelt https://kalstein.ee/.

Kalstein

PARIIS – PRANTSUSMAA

Ettevõtte peakorter

2 rue Jean Lantier, 75001, Pariis – Prantsusmaa.
(+33) 01 78 95 87 89(+33) 6 80 76 07 10

sales@kalstein.eu

ASUKOHAD

Oleme alati lähedal.



VAHENDID

Makseviisid ja kohaletoimetamine



Jälgi meie tegevust sotsiaalsete võrgustike

Olge kursis kõigi sektori uudistega.


Product Enquiry

Saada sõnum
Tere
Mida me saame teid aidata?